不同组方原则方剂对实验性类风湿关节炎模型影响的观察*

杏林奇葩

不同组方原则方剂对实验性类风湿关节炎模型影响的观察*
         张枢明   徐世杰   吕爱平   周瑕青  滕静茹  李艳  王少君   王安民
        我们观察了不同组方原则组成的方剂，对实验性类风湿关节炎（RA）模型的影响，结果显示其影响是有差异的，据些为中医药治疗RA提供了一条新的思路，现将实验结果报告如下：
                          材料与方法
1 动物   选择重20g左右的DBA雄性小鼠50只，由中国中医研究院动物室提供。
2 方法   50只小鼠随机分成为5组，每组10只。（1）正常组普通饲料喂养；（2）造模组采用Ⅱ型胶原免疫法（Collagan-Induced Arhtititis. CIA）(1)制成关节炎模型；（3）雌激素组在造模1周后给以乙烯雌酚0.5ml(10mg/ml)，每日1次灌胃，持续1周后给服中药I号方。其基本组成为生黄芪、赤芍、槟榔、草果、川厚朴、知母、防风、甘草等，水煎2次，将药液混合，浓缩至150ml，其浓度为2.207g/ml，按0.6ml /只（70g生药 kg体重）灌胃，持续4周；（5）中药Ⅱ在造模1周后给服中药Ⅱ方，其基本组成为生黄芪、赤芍、防风、地龙、灸蜂房、穿山甲、皂角刺、仙灵脾、补骨脂等，上药水煎2次，混合浓缩到150ml，其浓度3.52g/ml，按 0.4ml/只（70g 生药/kg体重）灌胃，持续4周。
   上述5组均在造模后第7天起用游标测微尺测量小鼠右踝关节肿胀程度，每周测1次。
   造模5周（给药4周）后各组动物均行颈椎接脱处死，取膝、踝、肘、腕关节，10%福尔马林固定，5%硝酸脱钙、酒精逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察其病理学改变。
                        结果
1各组踝关节肿胀程度比较  造模前5组踝关节平均值相近，有可比性，造模2周（给药1周）后，各造模级动物踝关节均大于正常组，说明造模组动物踝关节均有不同程度肿胀，给药4周后造模各组中以造模组为最大，其次为中药Ⅱ组，中药I组和雌激素组，见附表。
     附表   各组小鼠踝关节肿胀程度比较（X±S）        
组别
鼠数
                               踝关节肿胀（mm）

给药前
给药4周

正常
10
2.65±0.20                    2.85±0.22

造模
10
3.88±0.42*                   4.20±0.18*

雌激素
10
4.11±0.30*                   3.62±0.12*

中药I
10
3.95±0.36*                   3.90±0.28*

中药Ⅱ
10
4.08±0.18                    3.96±0.18

注：与正常组比较 ，* P<0.01，与造模组比较P<0.05
2 病理学改变     造模组动物造模5周后，小鼠关节内均出现明显滑膜细胞增生，可见大量的淋巴细胞浸润，关节软骨组织肿胀，排列不规则，结果表明造模组关节滑膜炎症、关节软骨破坏坏死。
   中药Ⅱ组与造模组比较，滑膜细胞增生，滑膜组织中淋巴细胞浸润程度均较造模组为轻，关节软骨主要显示为扁平剥脱，未见明显关节软骨缺损。说明滑膜炎症虽有所控制但不明显，而关节软骨的脶伤却轻微。
雌激素组与造模组比较，滑膜细胞增生不明显，滑膜组织中血管充血、水肿较轻，只见少量的淋巴细胞浸润，关节软骨表现为扁平剥脱，呈点状或小片状、或浅层之关节软骨肥大缺损，滑膜与软骨连接区未见明显改变，说明该组滑膜炎症、关节软骨损伤均较造模组明显为轻。
中药I组与造模组比较，滑膜细胞增生不明显，滑膜细胞中只有少数散在淋巴细胞、关节软骨表面光滑，部分动物关节软骨可见轻度扁平剥脱，未见关节软骨缺损，说明该组滑膜炎症轻微，关节软骨损伤不明显。
以上的实验结果提示中药I、Ⅱ号方对CIA关节炎模型均有一定的良性影响，但二者有区别，已知RA的病理变化首先是滑膜炎，进一步发展则出现血管翳覆盖并与软骨粘连向软骨侵入，进而造成软骨脶伤及骨骺的破坏。而CIA关节炎模型也呈现相似的病理进程，1周内首先出现滑膜炎，2~3周内出现软骨损害。I号方表现为对滑膜炎症有良好的防治作用，而Ⅱ号方在对滑膜炎症控制不理想情况下，表现出对软骨损伤有较好的防治作用。
              讨论
在RA早期，即相当于现代医学病理上的滑膜炎期，临床上的急性期、X线病理学第1期骨质疏松期，我们认为其发病形式与中医学中伏邪内发的特点相似，而病变组织——滑膜作为一种膜样组织当属于中医的膜原范畴，位于半表半里之位，故治以达原饮为主宣发膜原，并以黄芪赤风汤增加扶正达邪之力，实验结果表明本方对滑膜炎症有良好的防治作用，临床也证实对RA初起的急性期患者有较好的疗效。
而在RA中期，即相当于现代医学病理上的肉芽肿期，临床上的亚急性期、X线病理学第Ⅱ期破坏期，此期的病理情况与中医学《内经》中“邪气内侵，内伤骨为骨蚀”的论述相合，因此借鉴中医骨外科内治附骨疽的经验，在补肾益气的整体治法中，重用生黄芪、皂角刺、蜂房、穿山甲等品，以期肤正托邪出外，而达护骨健骨之效。实验结果显示本方在对滑膜炎症控制并不理想的情况下，对软骨破坏确有较好的保护作用。
在RA的晚期，即相当于现代医学病理上的纤维化期，临床上的慢性期，X组病理学第Ⅱ期严重破坏期和第Ⅸ期强直期，我们医家用传统接骨药痹证的启发，结合内服中药促进骨折愈合的研究，观察了传统接骨药对关节软骨损伤的影响，结果显示其确有促进软骨修复的作用。
以上实验结果初步证明，不同组方原则指导的组成的中药方剂，对RA不同时期的不同病理变化，有一定的针对性，其将为临床运用中医药治疗RA提供一条可资借鉴的新思路。
   参考文献
1．Trentham DE. Autoimmunity to type Ⅱ collagen anexperimental model of arthritis J. Exp Med 1977;146:857-868
2．吕爱平，肾虚痹证（类风湿性关节炎）发病机理研究，中医杂志，1995；36（8）：492
3．张枢明，瑞竹堂经验方治痹用药特点及其启示，中国骨伤，1995；8（5）：35
4．吕爱平，传统接骨药对创伤性骨痹影响的实验研究，中医杂志，1994；35（5）：31

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